Método VIDAS®

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Método VIDAS®

Los instrumentos VIDAS® y mini VIDAS® son sistemas de inmunoensayos multiparamétricos que han sido diseñados para proporcionar unos resultados de laboratorio más precisos y en un menor tiempo. 


Este método permite la detección de diversos microorganismos como Listeria monocytogenes, E.coli O157, Listeria spp., Campylobacter, Enterotoxinas estafilocócicas y Salmonella siendo este último el que nos interesa para este estudio.  

Este método es una tecnología basada en un Ensayo de Fluorescencia Ligado a Enzima (ELFA). Los reactivos que se usan están listos para el empleo y los protocolos están optimizados con muestras de Biomerieux.   Se considera un método innovador debido a que está basado en la ingeniería de anticuerpos, inmunoconcentración y en la tecnología de proteína recombinante de fagos.  

*Características del método VIDAS®.  

-       Flexibilidad y productividad: de 1 a 60 test por hora.
-       Multiparamétrico: puede analizar varios parámetros simultáneamente.
-       Son equipos robustos.
-       Se requiere menos pipeteo.
-       Estandarización del paso de calentamiento. 
 
*Metodología (método VIDAS
® SLM). 
 
El primer paso a realizar es un pre-enriquecimiento en medio no selectivo:  

-       Se toma en condiciones asépticas entre 10-50 g de la muestra (salvo que se especifique lo contrario se pesan 25 g).
-       Se tritura y homogeneiza el alimento con agua de peptona tamponada con un stomacher.
-       Se incuba la muestra que se encuentra en una bolsa de plástico con un filtro, a 37ºC durante 18-20 horas. 

Posteriormente se realiza un enriquecimiento en medios selectivos: Una vez transcurrido el tiempo de incubación, se transfieren 0.1 ml del caldo de preenriquecimiento, con la ayuda de una pipeta automática, a un tubo de con 10 ml de Rappaport Vassiliadis Caldo de soja (RVS), la mezcla se incuba de 6 a 8 horas a 41º C ± 1,0ºC.  

Al finalizar el enriquecimiento se lleva a cabo un post-enriquecimiento transfiriendo 1 ml de la solución de Rappaport Vassiliadis Caldo de soja (RVS) a 10 ml de Caldo M, el cual se incuba de 16-20 horas a 45ºC ± 1,0ºC; cuando se finaliza la incubación, se agita el caldo M y se toma 1ml de este que se transfiere a un tubo de ensayo que se calienta a 95ºC durante 15 min y posteriormente se enfría con agua fría, siendo sobre esta mezcla que se usa para realizar la prueba VIDAS®. 

 De esta última solución se toman 0.5µl y se depositan en las cajetillas que contienen los reactivos para realizar el análisis, éstas se introducen en el equipo con los “bastones” que van transfiriendo una cantidad de una celda a otra, hasta la última de ellas donde se determinará cuantitativamente la presencia de Salmonella.  

Las muestras deben de ser congeladas por si se necesitase repetir el ensayo para una confirmación, la cual se realizaría en un medio selectivo indicado en las normas CEN, ISO o AFNOR, siendo elegido en este caso el método XLD.  

*Validación del método VIDAS® SLM.  

El estudio de validación se ha llevado a cabo siguiendo la norma EN ISO 16140:2003 sobre protocolo de validación de métodos alternativos.   Para validar el método para carne se parte de 63 muestras, 30 de las cuales no están contaminadas con Salmonella (muestras negativas) y 33 muestras contaminadas con Salmonella (muestras positivas).  

Los primeros parámetros en evaluar son la precisión relativa (AC), especificidad relativa (SP) y sensibilidad relativa (SE). Los tres parámetros tienen un valor del 100%.  

●     Precisión: proximidad del acuerdo entre un resultado de la prueba y el valor de referencia aceptado.
 ●     Sensibilidad: capacidad del método alternativo para detectar dos cantidades diferentes de analito medidas por el método de referencia dentro de una matriz.
●     Especificidad: es el grado en el que un método se ve afectado (o no) por los otros componentes presentes en una muestra multicomponente.  

El nivel de detección relativa es el menor número de microorganismos cultivables que se pueden detectar en una muestra. En el caso de la carne picada de aves es de 0,5 para el método VIDAS® SLM y el método de referencia y para la carne cruda, de 0,7 y 0,9 para el método de referencia y el método VIDAS® SLM, respectivamente.   En cuanto a la inclusividad, es la capacidad del método alternativo para detectar la Salmonella en una amplia gama de cepas. En este caso, de las 65 cepas de Salmonella que se ensayaron, todas fueron detectadas por ambos métodos.  

En cuanto a la exclusividad, es la no detección de cepas que no son Salmonella. En este caso, de 30 cepas de bacterias que por el método de referencia no se detectaba, mediante VIDAS® SLM se detectaron 3.  

Fuente:
AENOR, Asociación Española de Normalización y Certificación (2003). UNE-EN ISO 6579. Método horizontal para la detección de Salmonella spp.
BioMérieux, VIDAS® 30: Healthcare. 
BioMérieux, VIDAS®: Constantemente evolucionando con usted.
Robledo Lopez, Agostina. (2015). Investigación de Salmonella spp. en alimentos mediante el método tradicional ISO 6579 y dos métodos inmunoenzimáticos. Trabajo final de grado. Escola Superior d'Agricultura de Barcelona, Grau en Enginyeria Alimentària.


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